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標準的ELISA檢測試劑盒通常包含哪些基礎組分?

日期:2025-10-20 15:38:46

    標準ELISA檢測試劑盒的基礎組分主要圍繞“抗原-抗體特異性結合”和“信號檢測”兩大核心,通常包含五大類關鍵試劑。

一、核心特異性結合試劑
    這類試劑是ELISA特異性的保障,直接決定檢測目標。
    包被抗體/抗原:已預先包被在酶標板孔內,或單獨提供需自行包被。其作用是特異性捕獲樣本中的目標分析物(抗原或抗體)。
    檢測抗體:通常為特異性識別目標分析物的二抗,部分試劑盒會直接提供酶標抗體(已偶聯酶)。
    酶標記物:若檢測抗體未偶聯酶,會單獨提供酶(如辣根過氧化物酶HRP、堿性磷酸酶AP)及對應的偶聯試劑,或直接提供酶標二抗。
 
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二、信號檢測與顯色試劑
    這類試劑用于將“抗原-抗體結合”的免疫反應轉化為可觀察的顏色信號。
    底物溶液:與酶標記物特異性反應并產生顏色變化的化學物質。例如HRP常用TMB(3,3',5,5'-四甲基聯苯胺),AP常用pNPP(對硝基苯磷酸酯)。
    終止液:用于終止底物與酶的反應,固定顏色信號,便于后續讀數。常用的有硫酸溶液(針對HRP-TMB系統)。
 
三、樣本與標準品對照
    這類試劑用于定量分析和實驗有效性驗證。
    標準品:已知濃度的目標分析物,用于繪制標準曲線,推算樣本中目標物質的濃度。通常提供多個梯度濃度。
    質控品(QC):分為陽性對照和陰性對照,用于驗證實驗過程是否正常、試劑是否有效。
    陽性對照:含已知濃度目標分析物,應出現陽性信號。
    陰性對照:不含目標分析物,應無信號或信號極低。
 
四、洗滌與緩沖試劑
    這類試劑用于去除非特異性結合物,減少背景干擾。
    洗滌緩沖液(WashBuffer):通常為含吐溫-20的磷酸鹽緩沖液(PBS-T),用于清洗酶標板,去除未結合的試劑和樣本雜質。
    樣本稀釋液(SampleDiluent):用于稀釋樣本,使其濃度落在標準曲線范圍內,同時維持反應體系的pH和離子強度。
 
五、輔助耗材
    部分試劑盒會配套提供實驗必需的耗材,方便直接使用。
    預包被的酶標板:通常為96孔聚苯乙烯板,已完成包被抗體/抗原的步驟。
    封板膜:防止孵育過程中液體蒸發和交叉污染。