ELISA結果中 “Cut-off 值” 的含義是?怎么計算?
日期:2025-08-21 15:03:09
在ELISA酶聯免疫吸附試驗中,Cut-off值(臨界值) 是判斷檢測結果為 “陽性” 或 “陰性” 的分界點,其核心作用是區分 “有意義的特異性信號” 與 “無意義的背景信號或非特異性信號”,確保檢測結果的準確性和一致性。
一、Cut-off值的含義
ELISA通過酶催化底物產生的吸光度(OD值)反映樣本中目標物質(如抗原、抗體、蛋白等)的含量。由于實驗中存在試劑背景、非特異性結合等因素,即使樣本中不含目標物質,也可能產生一定的OD值(即 “陰性背景”)。
Cut-off值是人為設定的臨界OD值:
當樣本OD值≥Cut-off 值 時,判定為 “陽性”(提示樣本中可能存在目標物質,且信號強度超過背景閾值);
當樣本OD值
其本質是通過統計學或標準化方法,平衡檢測的 “靈敏度”(避免漏檢)和 “特異性”(避免假陽性),減少實驗誤差對結果判讀的影響。
二、Cut-off值的常見計算方法
Cut-off值的計算需根據實驗目的、樣本類型(如血清、細胞上清)和試劑特性(如是否為商品化試劑盒)確定,常見方法如下:
1. 基于陰性對照的計算(最常用)
通過檢測一定數量的 “陰性對照樣本”(已知不含目標物質的樣本,如健康人血清、空白緩沖液等),利用其 OD 值計算 Cut-off 值,適用于自定義實驗或非標準化檢測。
公式 1:均值+2倍標準差(x?+2SD)
檢測至少20份陰性對照樣本,計算其 OD 值的平均值(x?)和標準差(SD);
Cut-off值=x?+2SD。
原理:正態分布中,95%陰性樣本OD值會落在 “x? ± 2SD” 范圍內,超過此范圍的信號被認為是 “異常信號”(可能為陽性)。
公式 2:均值+3倍標準差(x? + 3SD)
適用于對特異性要求極高的場景(如傳染病診斷),可減少假陽性,但可能降低靈敏度(增加漏檢風險)。
公式 3:均值×系數(如 1.1-1.5)
當陰性對照OD值波動較小時,直接用 “陰性均值 × 固定系數” 作為 Cut-off 值(系數需通過預實驗確定)。
2. 基于陽性對照和陰性對照的組合計算
適用于需要同時考慮陽性信號強度的場景(如競爭法 ELISA),或商品化試劑盒的標準化設定。
公式:(陰性對照均值+陽性對照均值)×系數
例如:Cut-off值=(陰性均值 + 陽性均值)×0.5,通過平衡陰、陽性信號的中間值作為臨界線。
3. 商品化試劑盒的固定 Cut-off 值
市售ELISA試劑盒通常會直接提供預設的 Cut-off 值或明確的計算方法(如說明書中指定 “陰性對照均值 ×1.2”),其數值經過大量驗證,確保不同實驗室、不同批次檢測結果的一致性。
原因:商品化試劑的生產工藝標準化,陰性背景和信號強度更穩定,無需用戶自行計算。
4. 基于臨界參考品的計算
在臨床診斷類ELISA中(如病毒抗體檢測),可能使用 “臨界參考品”(已知接近陽性/陰性邊界的樣本),直接將其OD值作為 Cut-off值,確保與臨床診斷標準一致。
三、注意事項
陰性對照的質量:陰性對照需確認真實不含目標物質,且數量足夠(通常≥20份),否則會導致Cut-off值偏差。
實驗重復性:若同一樣本多次檢測的OD值接近Cut-off值(即 “灰區”),需重復實驗或結合其他方法驗證,避免誤判。
方法學差異:不同ELISA類型(如間接法、雙抗體夾心法、競爭法)的Cut-off值計算邏輯可能不同,需結合具體實驗設計調整。
Cut-off值是ELISA結果判讀的 “標尺”,其計算核心是通過統計學方法排除背景干擾,確保檢測結果的可靠性,具體方法需根據實驗目的和樣本特性靈活選擇。






