外泌體的提取實(shí)驗(yàn)方案
日期：2024-07-02 15:19:22
外泌體是一類含有脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)的小泡狀體，包裹著細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等成分，具有重要的細(xì)胞間通訊和信號(hào)傳遞功能。提取外泌體是研究其生物學(xué)功能和臨床應(yīng)用的關(guān)鍵步驟。
以下是一種常用的外泌體提取實(shí)驗(yàn)方案：
材料準(zhǔn)備：
細(xì)胞培養(yǎng)基（含有血清的培養(yǎng)基）
離心管
超聲破碎儀
超速離心機(jī)
過(guò)濾器（0.22μm）
Buffer A（10mM Tris-HCl, pH 7.4）
Buffer B（無(wú)血清的培養(yǎng)基）
步驟：
將培養(yǎng)基中的外泌體產(chǎn)生的細(xì)胞培養(yǎng)在含有血清的培養(yǎng)基中，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到80-90%后更換Buffer A培養(yǎng)基。
收集培養(yǎng)基，使用低速離心（3000g，10分鐘）去除細(xì)胞碎片。
用超聲波破碎儀在冰上將上述液體進(jìn)行超聲波破碎。
使用超速離心機(jī)在4℃下離心10分鐘，去除細(xì)胞碎片和大顆粒物。
取上清液，使用0.22μm的過(guò)濾器過(guò)濾。
將過(guò)濾后的上清液再次使用超速離心機(jī)在4℃下離心30分鐘，收集上清液。
外泌體的沉淀物進(jìn)行Buffer B緩沖液沖洗后，再次使用超速離心機(jī)在4℃下離心30分鐘。
收集上清液即提取到的外泌體。
在實(shí)驗(yàn)中要盡量避免外泌體的污染和損壞，同時(shí)要根據(jù)具體細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行條件的優(yōu)化和調(diào)整。
