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小分子半抗原(如分子量<1000Da的化合物、多肽),定制多克隆抗體時需通過載體蛋白(如BSA、KLH)偶聯增強免疫原性,服務商通常推薦哪種載體,

日期:2025-09-08 13:50:56

    定制多克隆抗體時,服務商通常推薦 KLH(鑰孔血藍蛋白)作為小分子半抗原的載體蛋白。
 
    KLH是一種大的聚集蛋白,分子量范圍為 450000-10000000Da,它具有較高的免疫原性,能更有效地刺激機體的免疫系統產生抗體。而且KLH與脊椎動物蛋白無同源性,減少了非特異性反應的可能性。不過,KLH的水溶性相對較差,在使用時可能需要注意溶液的配制和處理。
 
    BSA(牛血清白蛋白)也是常用的載體蛋白之一,它來源廣泛、制備簡單、成本較低,且水溶性好。但BSA的免疫原性相對較弱,并且在一些實驗中可能會因為常用作封閉試劑而產生非特異性結合,影響實驗結果。

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偶聯效率的檢測方法主要有以下幾種:
 
    1、BCA法:通過測定偶聯前后上清液中游離蛋白的濃度,來計算抗體偶聯率。公式為:偶聯率=1-游離抗體量/初始抗體量。
    2、熒光標記法:若抗體預先標記了熒光素(如FITC),可以通過熒光分光光度計定量檢測載體表面的熒光強度,從而反映偶聯效率。
    3放射性標記法:用放射性同位素標記半抗原或載體蛋白,然后通過測定偶聯物中的放射性強度來計算偶聯效率。這種方法靈敏度高,但需要特殊的設備和防護措施。
    4、SDS-PAGE電泳法:通過 SDS-PAGE 電泳分離偶聯物和未偶聯的成分,然后通過染色或掃描分析來評估偶聯效率。如果偶聯成功,會出現分子量較大的偶聯物條帶。
    5、ELISA法:可以通過ELISA法檢測偶聯物與抗體的結合活性,間接反映偶聯效率。將偶聯物包被在酶標板上,加入特異性抗體,然后通過檢測酶標二抗的信號強度來評估偶聯物的免疫活性。