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酶標儀的波長設置需要與ELISA試劑盒的底物類型匹配嗎??

日期:2025-12-12 13:29:04

    酶標儀的波長設置必須與ELISA試劑盒的底物類型嚴格匹配,這是保證檢測結果準確的關鍵前提。
    不同底物在酶促反應后會生成特定的有色產物,這些產物的最大吸收波長(λmax)是固定的,酶標儀只有在對應波長下檢測,才能捕獲到最強的吸光度信號,同時避免非特異性背景干擾。
 
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常見底物與對應檢測波長的匹配關系如下:
1、TMB(四甲基聯苯胺)
    這是HRP(辣根過氧化物酶)標記物最常用的底物,反應后生成藍色產物;加入酸性終止液后,產物會變為黃色,其最大吸收波長為450nm。部分實驗會搭配630nm作為參比波長,用于扣除背景吸光度,提高結果穩定性。
OPD(鄰苯二胺)
    同樣適用于HRP標記物,反應后生成橙黃色產物,最大吸收波長為492nm,終止液一般為硫酸溶液,終止后顏色會保持一段時間穩定。

2、
pNPP(對硝基苯磷酸二鈉)
    適用于AP(堿性磷酸酶)標記物,反應后生成黃色產物,最大吸收波長為405nm,這類反應通常不需要額外加終止液,或僅用堿性溶液終止。
 
    如果波長設置不匹配,比如用492nm檢測TMB終止后的黃色產物,會導致檢測到的吸光度值偏低,無法準確反映樣本中目標物的濃度,甚至出現假陰性結果。