血清樣本采集后,如何處理才能用于ELISA試劑盒檢測??
日期:2025-12-11 09:21:52
血清樣本采集后,需通過“規范處理-避免干擾-正確保存”三步核心流程,才能保證樣本適用性和檢測結果準確性,具體操作如下:
一、血清分離:核心是“及時、溫和、徹底”
采集后初步處理:血液采集到無抗凝劑的真空采血管(血清管)后,室溫靜置30-60分鐘(避免暴曬或低溫),讓血液自然凝固(形成血凝塊),切勿搖晃試管(防止溶血和凝血因子激活,干擾檢測);
離心分離血清:凝固完成后,以2000-3000×g離心10-15分鐘(離心力不足或時間過短會導致血清分離不徹底,含血細胞雜質);離心后試管內分為三層(上層淡黃色血清、中層白細胞/血小板、下層紅細胞),用無菌移液管吸取上層血清,避免觸及中層和下層沉淀;
避免溶血:全程操作輕柔,不劇烈震蕩、不反復凍融(溶血會釋放紅細胞內的血紅蛋白、酶類等物質,可能抑制抗原-抗體結合,或干擾酶促顯色反應),若血清出現紅色、粉紅色(提示溶血),建議重新采集樣本。

二、樣本預處理:消除基質干擾,適配試劑盒要求
澄清與過濾(按需):若分離后的血清存在渾濁、絮狀物(可能是脂蛋白、纖維蛋白殘留),可再次以3000×g離心5分鐘,或用0.22μm濾膜過濾,去除雜質(避免堵塞試劑盒反應孔,或影響反應均一性);
稀釋或濃縮(按說明書):
若樣本中目標檢測物濃度超出試劑盒標準曲線范圍(過高),需用試劑盒配套的樣本稀釋液(不可用蒸餾水或生理鹽水,避免破壞反應體系pH和離子強度)按比例稀釋(如1:10、1:50),稀釋后需充分混勻;
若濃度過低,可通過真空濃縮、超濾等方式濃縮(需避免高溫,防止目標物活性喪失);
避免外源污染:移液管、離心管需提前滅菌,操作全程在無菌環境下進行(防止細菌、真菌污染,導致樣本變質或干擾檢測);切勿向血清中添加防腐劑、抗凝劑(如肝素、EDTA),除非試劑盒說明書明確允許。
三、樣本保存與解凍:防止目標物降解
短期保存:分離后的血清若在24-48小時內檢測,可置于2-8℃冷藏(冰箱冷藏室,避免靠近冷凍室),期間需密封試管(防止揮發或交叉污染);
長期保存:若需長期存放(超過48小時),需按單次檢測用量分裝為小體積(如50μL、100μL),快速置于-20℃或-80℃冷凍保存(分裝可避免反復凍融,保護目標蛋白/抗原活性);
解凍方式:檢測前取出冷凍樣本,置于4℃冰箱緩慢解凍(或室溫梯度解凍),切勿直接煮沸、高溫加熱;解凍后需輕輕顛倒試管5-10次充分混勻,必要時可再次離心(3000×g,5分鐘)去除解凍后析出的沉淀,確保樣本均一性;
注意事項:樣本凍融次數盡量控制在1-2次內,超過3次會導致目標物活性下降、檢測值偏低;若樣本保存期間出現明顯渾濁、異味、沉淀無法去除,需丟棄,不可用于檢測。
所有操作需遵循試劑盒說明書的特殊要求(如部分試劑盒對血清采集時間、離心參數、稀釋比例有明確規定);
若檢測樣本為特殊血清(如溶血血清、脂血血清、黃疸血清),需提前確認試劑盒是否耐受(部分試劑盒含抗干擾成分,可兼容輕度異常血清,重度異常則需更換樣本)。






