使用RNA pulldown試劑盒后,剩余的RNA樣本該如何保存以留作后續(xù)實(shí)驗(yàn)?
日期:2025-11-18 10:19:45
剩余RNA樣本需在抑制RNase降解的條件下保存,短期(≤1周)可-20℃冷藏,長(zhǎng)期(>1周)需-80℃分裝凍存,避免反復(fù)凍融,同時(shí)需搭配RNA保護(hù)劑或無(wú)酶環(huán)境。
一、保存前的關(guān)鍵預(yù)處理
去除殘留污染物:若樣本含試劑盒殘留的蛋白、鹽離子等,需通過(guò)酚-氯仿抽提或柱式純化法純化RNA,避免影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
確保RNA完整性:保存前可通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳或Nanodrop檢測(cè)RNA純度(A260/A280≈1.8-2.1)和完整性,避免保存降解樣本。
選擇合適保存液:優(yōu)先溶于RNase-free水或TE緩沖液(pH8.0),也可加入RNA保護(hù)劑(如RNAlater),抑制RNase活性。

二、分場(chǎng)景保存方法
短期保存(1周內(nèi)使用):將純化后的RNA分裝至無(wú)酶離心管,加入適量保存液,-20℃冷藏。此條件適合快速后續(xù)實(shí)驗(yàn)(如RT-PCR、Northernblot),避免長(zhǎng)期凍融損傷。
長(zhǎng)期保存(超過(guò)1周或長(zhǎng)期備份):將RNA分裝為小體積(10-50μL/管),避免反復(fù)凍融,放入-80℃冰箱。可加入甘油(終濃度10%-20%)提升穩(wěn)定性,或置于液氮中超低溫長(zhǎng)期存儲(chǔ)(適合珍貴樣本)。
避免不當(dāng)保存方式:嚴(yán)禁室溫放置超過(guò)1小時(shí),不可直接暴露于空氣或反復(fù)凍融(每次凍融都會(huì)導(dǎo)致RNA斷裂降解)。
三、保存后的復(fù)蘇與驗(yàn)證
復(fù)蘇時(shí)快速解凍:從-80℃取出后,立即置于冰上快速融化,避免室溫緩慢解凍導(dǎo)致RNase激活。
復(fù)蘇后質(zhì)量檢測(cè):使用前需重新檢測(cè)RNA純度和完整性,若出現(xiàn)降解(如電泳條帶模糊、A260/A280異常),需重新提取或放棄使用。






