樣本的儲(chǔ)存條件對(duì)ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果的影響是什么，如何制定樣本預(yù)處理的標(biāo)準(zhǔn)化流程?
日期：2025-11-18 09:57:42
低溫、短時(shí)間儲(chǔ)存且避免反復(fù)凍融能最大程度維持樣本中抗原/抗體活性，標(biāo)準(zhǔn)化流程需圍繞“控溫、控時(shí)、控凍融”三大核心制定。
一、儲(chǔ)存條件對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響規(guī)律
1.溫度的影響
4℃短期儲(chǔ)存（1-3天）：樣本成分較穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果波動(dòng)小，適合臨時(shí)存放。
-20℃儲(chǔ)存（1-3個(gè)月）：多數(shù)抗原/抗體活性可保留，但部分不穩(wěn)定成分（如酶類、小分子抗原）可能緩慢降解，導(dǎo)致檢測(cè)值偏低。
-80℃儲(chǔ)存（6-12個(gè)月）：能長期穩(wěn)定保存樣本，成分降解速率顯著降低，是長期儲(chǔ)存的首選溫度。
室溫儲(chǔ)存（>2小時(shí)）：樣本中蛋白易變性、降解，或出現(xiàn)非特異性結(jié)合，導(dǎo)致結(jié)果偏高或偏低，且重復(fù)性差。
2.儲(chǔ)存時(shí)間的影響
儲(chǔ)存時(shí)間與檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性呈負(fù)相關(guān)，時(shí)間越長，抗原/抗體活性損失越多。
短期儲(chǔ)存（≤1周）：無論4℃還是-20℃，結(jié)果偏差通常在可接受范圍（<10%）。
長期儲(chǔ)存（>3個(gè)月）：即使-80℃條件下，也可能出現(xiàn)檢測(cè)信號(hào)減弱，需在結(jié)果分析時(shí)考慮校正。
3.反復(fù)凍融的影響
每一次凍融都會(huì)破壞細(xì)胞膜和蛋白結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致抗原/抗體釋放或變性。
反復(fù)凍融≥3次時(shí)，檢測(cè)值可能下降15%-30%，且離散度增大，是影響結(jié)果重復(fù)性的主要因素之一。
凍融過程中產(chǎn)生的冰晶還可能引發(fā)樣本成分聚集，干擾抗原與抗體的特異性結(jié)合。
二、樣本預(yù)處理標(biāo)準(zhǔn)化流程制定
1.樣本采集與初步處理
嚴(yán)格按照樣本采集規(guī)范操作，血清/血漿樣本采集后及時(shí)離心分離（2000-3000rpm，10-15分鐘），避免溶血、凝血塊殘留。
腦脊液樣本采集后立即送檢，若需短期存放，直接置于4℃冰箱，無需額外處理。
2.儲(chǔ)存前分裝處理
分離后的樣本按單次檢測(cè)用量分裝至無菌凍存管，每管體積匹配ELISA試劑盒的樣本需求量（如50-100μL）。
分裝后快速標(biāo)注樣本信息、采集日期和凍存次數(shù)，避免混淆。
3.分級(jí)儲(chǔ)存方案
臨時(shí)儲(chǔ)存（≤3天）：4℃冰箱冷藏，密封保存防止揮發(fā)和污染。
中期儲(chǔ)存（≤3個(gè)月）：-20℃冰箱凍存，放入密封盒中避免溫度波動(dòng)。
長期儲(chǔ)存（>3個(gè)月）：-80℃超低溫冰箱或液氮中儲(chǔ)存，確保溫度穩(wěn)定在-70℃以下。
4.凍融與復(fù)溫操作
樣本使用前從冰箱取出，置于冰上緩慢解凍，或4℃冰箱過夜解凍，禁止室溫快速解凍。
解凍后輕輕顛倒混勻3-5次，避免劇烈振蕩導(dǎo)致蛋白變性。
嚴(yán)格限制凍融次數(shù)，每管樣本凍融不超過2次，超過則廢棄。
5.質(zhì)量控制要點(diǎn)
儲(chǔ)存過程中定期抽查樣本，通過檢測(cè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控品，驗(yàn)證樣本穩(wěn)定性。
若樣本出現(xiàn)渾濁、沉淀或溶血加重，需重新評(píng)估是否適合檢測(cè)。
建立樣本儲(chǔ)存臺(tái)賬，記錄每批樣本的儲(chǔ)存條件、時(shí)間和使用情況，便于追溯。
