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使用ELISA檢測試劑盒時,出現非特異性顯色可能是什么原因?

日期:2025-11-07 10:49:27

    非特異性顯色主要源于樣本雜質、試劑問題、操作不當或固相載體非特異性結合,需針對性排查。

1、樣本相關原因
    樣本含大量蛋白、脂類或交叉反應物質,與抗體發生非特異性結合。
    樣本未充分離心或稀釋,雜質濃度過高引發背景干擾。
 
2、試劑相關原因
    抗體特異性不足,交叉反應率高,或濃度過高導致非特異性吸附。
    酶標記物純度不夠,存在游離酶,或底物、顯色液變質。
    洗滌液配方不當、未現配,無法有效去除未結合試劑。
 
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3、操作與載體原因
    孵育溫度過高、時間過長,促進非特異性結合。
    洗滌不充分,殘留未結合的抗原 / 抗體或酶標記物。
    酶標板未封閉或封閉不徹底,固相載體殘留活性位點。