檢測(cè)低濃度細(xì)胞因子時(shí)，選擇ELISA試劑盒應(yīng)優(yōu)先比較“靈敏度”還是“最低檢測(cè)限”，二者的定義和檢測(cè)邏輯有何不同？
日期：2025-10-15 11:35:08
在檢測(cè)pg/mL級(jí)別低濃度細(xì)胞因子時(shí)，選擇ELISA試劑盒應(yīng)優(yōu)先比較靈敏度。因?yàn)殪`敏度更貼近實(shí)際實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景下的檢測(cè)能力，而最低檢測(cè)限多是理想條件下的理論值，在復(fù)雜樣本中可能無法達(dá)到。
一、核心定義：本質(zhì)不同，適用場(chǎng)景有別
靈敏度（Sensitivity）：指試劑盒能可靠區(qū)分目標(biāo)物濃度變化的最小能力，通常以“檢測(cè)下限（LimitofDetection,LOD）”的實(shí)際驗(yàn)證值體現(xiàn)。它不僅關(guān)注“能否檢測(cè)到”，更強(qiáng)調(diào)“檢測(cè)結(jié)果是否穩(wěn)定可信”，會(huì)受試劑特異性、樣本背景信號(hào)等實(shí)際因素影響。
最低檢測(cè)限（MinimumDetectableDose,MDD）：指試劑盒理論上能檢測(cè)到的目標(biāo)物最低濃度，一般由廠家通過檢測(cè)空白緩沖液的3倍標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算得出。它僅反映理想狀態(tài)下的“理論檢出下限”，未考慮樣本基質(zhì)（如血清、細(xì)胞上清）中的干擾物質(zhì)，實(shí)際參考價(jià)值有限。
二、檢測(cè)邏輯：實(shí)際驗(yàn)證vs理論計(jì)算
1.靈敏度的檢測(cè)邏輯：貼近真實(shí)實(shí)驗(yàn)
廠家會(huì)用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋（如0pg/mL、1pg/mL、2pg/mL等），模擬不同濃度的目標(biāo)物樣本。
通過檢測(cè)各梯度的信號(hào)值，計(jì)算“信號(hào)值/空白信號(hào)值（S/N）”，通常將S/N≥3時(shí)對(duì)應(yīng)的濃度定為實(shí)際檢測(cè)下限。
部分嚴(yán)謹(jǐn)廠家還會(huì)用實(shí)際樣本基質(zhì)（如待檢測(cè)的血清或細(xì)胞上清）添加低濃度標(biāo)準(zhǔn)品，驗(yàn)證基質(zhì)是否影響檢測(cè)效果，最終結(jié)果更符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況。
2.最低檢測(cè)限的檢測(cè)邏輯：基于理想條件
僅使用不含目標(biāo)物的緩沖液作為空白樣本，反復(fù)檢測(cè)（如20次），計(jì)算空白信號(hào)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。
通過公式“最低檢測(cè)限=空白均值+3×SD”計(jì)算得出，整個(gè)過程未使用標(biāo)準(zhǔn)品驗(yàn)證信號(hào)響應(yīng)，也未涉及任何復(fù)雜樣本基質(zhì)。
這種計(jì)算方式忽略了實(shí)際樣本中可能存在的干擾物質(zhì)（如非特異性結(jié)合蛋白），導(dǎo)致其理論值往往低于實(shí)際檢測(cè)能達(dá)到的下限，參考意義較弱。
三、選擇建議：3個(gè)實(shí)操判斷要點(diǎn)
優(yōu)先看靈敏度的標(biāo)注形式，首選明確標(biāo)注“實(shí)際檢測(cè)下限（LOD）：XXpg/mL”且附帶標(biāo)準(zhǔn)曲線的產(chǎn)品，而非僅標(biāo)注“最低檢測(cè)限（MDD）”的產(chǎn)品。若標(biāo)注中包含“在血清/細(xì)胞上清中檢測(cè)靈敏度為XXpg/mL”，說明經(jīng)過樣本基質(zhì)驗(yàn)證，更值得優(yōu)先考慮。
關(guān)注批內(nèi)/批間變異系數(shù)（CV），低濃度檢測(cè)對(duì)重復(fù)性要求極高。即使靈敏度達(dá)標(biāo)，若批內(nèi)CV＞10%或批間CV＞15%，也可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果波動(dòng)大，無法準(zhǔn)確判斷低濃度差異，需優(yōu)先選擇CV值更低的試劑盒。
確認(rèn)特異性驗(yàn)證數(shù)據(jù)，細(xì)胞因子家族常存在同源性（如IL-6與其他IL-6家族因子），若試劑盒交叉反應(yīng)率高，會(huì)誤將其他物質(zhì)的信號(hào)計(jì)入，導(dǎo)致“假陽(yáng)性高濃度”，掩蓋真實(shí)的低濃度信號(hào)。需選擇廠家提供交叉反應(yīng)列表，且對(duì)目標(biāo)因子特異性＞95%的產(chǎn)品。
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