不同原理的ELISA試劑盒，在檢測同一目標(biāo)分子時(shí)，適用的樣本濃度范圍有何差異？
日期：2025-09-30 09:26:22
在檢測同一目標(biāo)分子時(shí)，雙抗體夾心法、間接法、競爭法ELISA試劑盒的適用樣本濃度范圍差異，核心源于各自檢測原理對信號放大效率、抗原結(jié)合位點(diǎn)利用方式的不同，具體差異如下：
從雙抗體夾心法來看，它通常適用于中高濃度至較高濃度的目標(biāo)分子檢測。這類試劑盒通過“包被抗體捕獲抗原+酶標(biāo)抗體結(jié)合抗原另一端”的雙位點(diǎn)結(jié)合模式，能形成穩(wěn)定的“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”復(fù)合物，且酶標(biāo)抗體直接與目標(biāo)抗原結(jié)合，信號放大效率較高——即使目標(biāo)分子濃度不算極低，也能通過酶促反應(yīng)產(chǎn)生可檢測的顯色信號。不過，當(dāng)樣本中目標(biāo)分子濃度過高時(shí)，可能出現(xiàn)“鉤狀效應(yīng)”（抗原過量導(dǎo)致抗體結(jié)合位點(diǎn)被飽和，反而使顯色信號下降），因此其上限會受抗體結(jié)合容量限制，一般不適合檢測遠(yuǎn)超試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線上限的極高濃度樣本（需稀釋后檢測），但整體適用區(qū)間偏向中高濃度范圍。
再看間接法，它的適用濃度范圍相對更偏向中低濃度至中高濃度，且對低濃度目標(biāo)分子的檢測能力通常優(yōu)于雙抗體夾心法（針對抗體檢測場景）。間接法通過“一抗結(jié)合抗原+酶標(biāo)二抗結(jié)合一抗”的模式，酶標(biāo)二抗可結(jié)合多個(gè)一抗的恒定區(qū)，形成“抗原-一抗-酶標(biāo)二抗”的信號放大鏈——這種“多對一”的結(jié)合方式（一個(gè)酶標(biāo)二抗可能結(jié)合多個(gè)已結(jié)合抗原的一抗），信號放大倍數(shù)比雙抗體夾心法更高，因此能檢測到更低濃度的目標(biāo)分子（尤其是檢測樣本中的抗體時(shí)，低濃度抗體也能通過二抗放大信號）。同時(shí)，由于間接法不依賴抗原的雙結(jié)合位點(diǎn)，只要一抗能特異性結(jié)合抗原，即使抗原濃度稍高，也不易出現(xiàn)類似雙抗體夾心法的鉤狀效應(yīng)，上限濃度相對更靈活，整體覆蓋了從較低濃度到中高濃度的區(qū)間，低濃度檢測優(yōu)勢更明顯。
最后是競爭法，它是三類方法中唯一適用于低濃度至極低濃度目標(biāo)分子的類型，同時(shí)也能應(yīng)對部分小分子抗原的檢測，但高濃度樣本需大幅稀釋。競爭法的原理是“樣本中的目標(biāo)抗原與酶標(biāo)抗原競爭結(jié)合包被抗體”——當(dāng)樣本中目標(biāo)抗原濃度低時(shí)，酶標(biāo)抗原能更多地結(jié)合包被抗體，顯色信號強(qiáng)；隨著目標(biāo)抗原濃度升高，酶標(biāo)抗原的結(jié)合被競爭抑制，顯色信號減弱。這種“信號與濃度負(fù)相關(guān)”的模式，決定了它對低濃度抗原的變化更敏感：即使樣本中目標(biāo)分子濃度極低（如pg級甚至更低），也能通過“酶標(biāo)抗原結(jié)合量的微小變化”體現(xiàn)為顯色信號的差異，從而被準(zhǔn)確檢測。但反過來，當(dāng)樣本中目標(biāo)抗原濃度過高時(shí)，會幾乎完全抑制酶標(biāo)抗原的結(jié)合，導(dǎo)致顯色信號接近空白值，無法區(qū)分具體濃度（需稀釋至低濃度區(qū)間再檢測），因此其核心適用范圍集中在低濃度至極低濃度，與雙抗體夾心法的中高濃度區(qū)間形成互補(bǔ)。
