怎么通過Levey-Jennings質(zhì)控圖監(jiān)控ELISA試劑盒檢測穩(wěn)定性？
日期：2025-08-11 16:35:41
Levey-Jennings質(zhì)控圖（L-J 圖）是臨床實驗室常用的質(zhì)控工具，通過連續(xù)監(jiān)測質(zhì)控品的檢測結(jié)果，判斷檢測系統(tǒng)（包括 ELISA 試劑盒、儀器、操作等）是否處于穩(wěn)定狀態(tài)。對于 ELISA 試劑盒，其檢測過程涉及抗原 - 抗體結(jié)合、酶催化反應(yīng)等多個步驟，易受試劑穩(wěn)定性、操作誤差、儀器波動等影響，因此需通過 L-J 圖監(jiān)控其檢測穩(wěn)定性。具體方法如下：
一、核心原理
L-J 圖以質(zhì)控品的檢測值（OD值）為縱軸，檢測批次/時間為橫軸，通過預(yù)設(shè)的 “中心線”（均值）和 “控制限”（標(biāo)準(zhǔn)差范圍），直觀展示質(zhì)控結(jié)果的波動趨勢。若結(jié)果在控制限內(nèi)且無異常趨勢，說明ELISA檢測系統(tǒng)穩(wěn)定；反之則提示存在誤差（隨機或系統(tǒng)誤差），需干預(yù)。
二、步驟：如何用 L-J 圖監(jiān)控 ELISA 穩(wěn)定性
1. 選擇合適的ELISA質(zhì)控品
質(zhì)控品是監(jiān)控的核心，需滿足：
基質(zhì)匹配：與 ELISA 檢測的樣本基質(zhì)一致（如血清、血漿），避免基質(zhì)效應(yīng)干擾；
濃度覆蓋：至少包含高、中、低3個濃度（覆蓋試劑盒的檢測范圍，尤其是臨床決策點附近）；
穩(wěn)定性好：與 ELISA 試劑盒同條件保存（如 4℃、-20℃），且在有效期內(nèi)穩(wěn)定，避免因質(zhì)控品自身降解導(dǎo)致結(jié)果偏差；
均一性高：同一批次質(zhì)控品的分裝差異小（批內(nèi)CV<5%）。
2. 確定L-J圖的關(guān)鍵參數(shù)（均值 X 和標(biāo)準(zhǔn)差 SD）
初始需通過多次檢測確定質(zhì)控品的 “預(yù)期值范圍”，作為質(zhì)控圖的基準(zhǔn)：
檢測次數(shù)：至少檢測20 個獨立批次（每批次按ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作檢測質(zhì)控品，記錄 OD值）；
計算均值（X）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）：
均值X=所有批次質(zhì)控品OD值的平均值（反映質(zhì)控品的 “靶值”）；
標(biāo)準(zhǔn)差SD=反映檢測結(jié)果的離散程度（批間變異）；
設(shè)定控制限：
通常以X±2SD作為警告限，X±3SD作為失控限（95% 的正常結(jié)果應(yīng)在X±2SD內(nèi)，99.7%在X±3SD內(nèi)）。
3. 繪制 Levey-Jennings 質(zhì)控圖
橫軸：檢測批次（如第 1 批、第 2 批…）或時間（如日期）；
縱軸：質(zhì)控品的OD值；
標(biāo)注關(guān)鍵線：
中心線（CL）：X；
警告限（WL）：X±2SD（通常用黃色線）；
失控限（AL）：X±3SD（通常用紅色線）。
4. 日常監(jiān)控：記錄并分析質(zhì)控結(jié)果
每次使用 ELISA 試劑盒檢測時，需同步檢測質(zhì)控品（與樣本同板、同操作步驟），將質(zhì)控品的OD值點入 L-J 圖中，按以下規(guī)則判斷穩(wěn)定性：
（1）判斷 “在控”：檢測系統(tǒng)穩(wěn)定
所有質(zhì)控品OD值均在 X±2SD 內(nèi)；
無明顯趨勢（如連續(xù) 5 點遞增 / 遞減）或偏移（如突然整體升高 / 降低）。
（2）判斷 “警告”：需警惕潛在誤差
出現(xiàn)12s 規(guī)則：1 個質(zhì)控點超出 X±2SD（但在 X±3SD 內(nèi)）。
此時需檢查：是否為偶然誤差（如加樣量偏差）、操作是否規(guī)范（如洗滌不充分）、試劑是否新鮮（如底物變質(zhì)）等，無需立即停止檢測，但需加強下一批次監(jiān)控。
（3）判斷 “失控”：檢測系統(tǒng)不穩(wěn)定，需干預(yù)
若出現(xiàn)以下情況，提示 ELISA 檢測系統(tǒng)存在系統(tǒng)誤差（如試劑失效、儀器故障）或嚴重隨機誤差，需暫停檢測并排查原因：
13s 規(guī)則：1 個質(zhì)控點超出 X±3SD（如高濃度質(zhì)控品 OD 值突然遠高于 X+3SD，可能因底物過量或酶結(jié)合物污染）；
22s 規(guī)則：連續(xù) 2 個質(zhì)控點超出同一側(cè) X±2SD（如中濃度質(zhì)控品連續(xù) 2 批 OD 值低于 X-2SD，可能因抗體活性下降）；
R4s 規(guī)則：同一批次高、低濃度質(zhì)控品的差值超出 4SD（如高濃度遠高于 X+2SD，低濃度遠低于 X-2SD，提示操作步驟混亂）；
趨勢性變化：連續(xù) 5 個以上質(zhì)控點呈遞增 / 遞減（如低濃度質(zhì)控品 OD 值逐批降低，可能因包被板抗體降解）；
偏移性變化：質(zhì)控點突然整體向一側(cè)偏移（如所有濃度質(zhì)控品 OD 值均較之前升高，可能因孵育時間過長）。
5. 失控后的處理：恢復(fù) ELISA 檢測穩(wěn)定性
一旦失控，需按以下步驟排查并糾正：
立即重復(fù)檢測：用新的質(zhì)控品復(fù)孔檢測，排除質(zhì)控品分裝誤差或偶然操作失誤；
排查誤差來源（結(jié)合 ELISA 操作特點）：
試劑問題：試劑盒是否過期（如酶結(jié)合物失活）、試劑是否變質(zhì)（如底物渾濁、抗體沉淀）、稀釋液是否污染；
操作問題：洗滌是否充分（殘留酶結(jié)合物導(dǎo)致背景升高）、加樣量是否準(zhǔn)確（移液器校準(zhǔn)失效）、孵育溫度 / 時間是否合規(guī)（如 37℃孵育超時導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加）；
儀器問題：酶標(biāo)儀是否校準(zhǔn)（波長偏差導(dǎo)致 OD 值不準(zhǔn)）、孵育箱溫度是否穩(wěn)定；
糾正后驗證：排除原因后，重新檢測質(zhì)控品，若結(jié)果回歸控制限內(nèi)，方可繼續(xù)使用 ELISA 試劑盒；若反復(fù)失控，需更換試劑盒批次或品牌。
三、注意事項
定期更新質(zhì)控參數(shù)：每 6 個月或檢測 50 批次后，重新計算 X 和 SD（剔除失控值），避免因試劑批次變化導(dǎo)致參數(shù)過時；
同時監(jiān)控多濃度質(zhì)控品：單一濃度可能無法反映全檢測范圍的穩(wěn)定性（如低濃度失控可能因試劑靈敏度下降）；
結(jié)合 ELISA 特性分析：例如，若空白孔 OD 值升高伴隨質(zhì)控品 OD 值異常，可能因洗滌不充分或底物污染。
通過 Levey-Jennings 質(zhì)控圖，可直觀捕捉 ELISA 檢測過程中的微小波動，及時發(fā)現(xiàn)試劑失效、操作偏差等問題，從而保證檢測結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性。
