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sec外泌體提取試劑盒步驟

日期:2023-05-19 11:31:32


    SEC (Size Exclusion Chromatography) 是一種常用的外泌體分離方法,可以將不同大小的外泌體進行分離,從而提取純凈的外泌體。以下是一般SEC外泌體提取試劑盒步驟:
 
    1、樣品處理:首先應該選擇一個合適的細胞培養基或體液來收集樣品,離心去除細胞碎片、細胞核等雜質,然后將樣品保存在-80℃的冰柜中。
 
    2、試劑準備:將試劑盒中的緩沖液等試劑按照說明書的要求配制好。注意保證試劑的新鮮度和純度。
 
    3、樣品稀釋:將冰凍的樣品緩緩化解,在適當的條件下進行均勻分散。
 
    4、樣品上清分離:將上述稀釋后的樣品采用離心管進行離心,去除細胞碎片和非細胞完整體,留下上清液。
 
    5、上清液過篩:將上清液通過0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾,以去除殘留的大顆粒物。
 
    6、SEC柱裝置:在SEC柱中填充固定相樹脂,并預先平衡樹脂至平衡緩沖液條件下。
 
    7、樣品加載:將經過過篩的樣品通過裝置好的SEC柱進行加載,注意保證樣品不超過SEC柱承載能力。
 
    8、沖洗收集:使用平衡緩沖液對SEC柱進行沖洗,收集出流液。
 
    9、上樣清洗液回收:收集每個分數管中的上樣清洗液,并使用RNA提取試劑盒進行RNA提取。


外泌體提取


 
    SEC法外泌體提取試劑盒操作相對簡單,而抽提的外泌體更純凈,可以應用于RNA、蛋白質以及其他生物分子的研究。需注意SEC法對外泌體數量有一定的限制,可在實驗過程中進行優化、改進。