Western blot（WB）是分子生物學(xué)和免疫學(xué)中常用的一種分析蛋白質(zhì)的技術(shù)。它通過(guò)電泳將不同蛋白質(zhì)分離，然后將其轉(zhuǎn)移到膜上，再使用特異性抗體檢測(cè)目標(biāo)蛋白質(zhì)。這個(gè)過(guò)程稱為Western blotting，而將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上的過(guò)程則稱為blotting。本文將提供WB轉(zhuǎn)膜的條件。

    WB轉(zhuǎn)膜是Western blotting中非常關(guān)鍵的一步，它需要將電泳的膠液中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，從而方便我們進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。下面就是WB轉(zhuǎn)膜的條件：

    蛋白質(zhì)載體的選擇：WB膜通常是由聚氟乙烯（PVDF）或硝酸纖維素（NC）制成，兩者均可選擇。

    轉(zhuǎn)移緩沖液的pH值：常用的轉(zhuǎn)移緩沖液是含Tris和甘氨酸的Transfer buffer。對(duì)于PVDF膜，可以使用低pH的轉(zhuǎn)移緩沖液，pH值可以在6.0~6.4之間。如果使用硝酸纖維素的膜，則需要使用高pH的轉(zhuǎn)移緩沖液，在pH值為8.3左右。

    轉(zhuǎn)移緩沖液的離子強(qiáng)度：轉(zhuǎn)移緩沖液中氯離子的濃度應(yīng)該在25~30 mM之間，而甘氨酸的濃度應(yīng)該在
10%（w/v）左右。這樣可以保證緩沖液中有足夠的離子來(lái)促進(jìn)蛋白質(zhì)的電泳遷移。

    蛋白質(zhì)遷移時(shí)間：蛋白質(zhì)遷移時(shí)間是一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)，必須根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和膠的類型來(lái)確定。通常情況下，PVDF膜的轉(zhuǎn)移時(shí)間在1.5~2小時(shí)左右，而硝酸纖維素膜的轉(zhuǎn)移時(shí)間則需要更長(zhǎng)一些，大約在16~24小時(shí)。

    蛋白質(zhì)遷移電流密度：電流密度的大小將會(huì)影響到蛋白質(zhì)遷移速率和膜上轉(zhuǎn)移效果。一般情況下，電流密度可以設(shè)置為0.8~1 mA/cm2。同時(shí)也需要注意，電流密度不能過(guò)大，否則可能會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)燒焦。

轉(zhuǎn)移膜的溫度：轉(zhuǎn)移溫度可以影響到蛋白質(zhì)電泳遷移的速率和均勻性。通常情況下，轉(zhuǎn)移膜的溫度在4℃左右可以保證較好的效果。

對(duì)于不同的實(shí)驗(yàn)和要求，條件也有所不同。選擇合適的轉(zhuǎn)膜條件可以在一定程度上提高實(shí)驗(yàn)的成功率和準(zhǔn)確性。