組織外泌體提取方法有哪些？

日期：2023-06-08 13:40:14

組織外泌體（Extracellular vesicles, EVs）通過分泌到細胞外部分泌物中傳遞信息。EVs在細胞間信號轉(zhuǎn)導和物質(zhì)傳遞等方面起到了重要作用。而提取高純度、活性的EVs是進行研究的前提和基礎。本文將介紹常見的組織外泌體提取方法，并對其優(yōu)缺點進行比較。

一、超速離心法

超速離心法（Ultracentrifugation, UC）是目前最常用的提取組織外泌體的方法之一，其基本原理是通過離心分離樣品中不同密度的成分。UC的操作步驟包括：第一步低速離心去除細胞碎片和細胞核，第二步高速離心去除大小不同的顆粒（如微粒子），第三步超高速離心沉淀組織外泌體。UC具有高效、簡單等優(yōu)點，但存在離心時間長、分離效果不穩(wěn)定等缺點。

二、密度梯度離心法

與UC類似，密度梯度離心法（Density gradient centrifugation, DGC）是一種通過離心分離出不同密度的成分的方法。與UC不同的是，DGC是通過在管內(nèi)構建含有不同濃度的離子溶液梯度，利用泳動作用將泡膜小囊泡分離出來。DGC具有純度高、分選精度好等優(yōu)點，但存在耗時長、操作復雜等缺點。

三、尺寸篩選法

尺寸篩選法（Size-exclusion chromatography, SEC）是一種利用柱填料篩分樣品的方法，在制備EVs時可選擇膜孔大小與EVs顆粒大小相對應的填料進行分離。SEC的優(yōu)點在于可以得到更為純凈的EVs，同時保留更多EVs的生物活性，但其缺點在于對前處理和柱填料的選擇要求高，通量也相對較低。

四、超濾法

超濾法（Ultrafiltration, UF）是利用中空纖維膜或多孔膜濾除EVs，細胞碎片和其他大分子雜質(zhì)。相比于其它方法，UF操作簡便、速度快，同時可以得到更為純凈的EVs，并且可以組合應用其他方法實現(xiàn)不同級別的分離和純化。但其缺點在于需要過濾器的選擇和膜孔大小的控制，同時不能分離不同密度的EVs。

以上四種方法都是常用的提取組織外泌體的方法，每種方法都有其優(yōu)缺點，在實際應用中需要選擇合適的方法。另外，隨著技術的發(fā)展和研究深入，不斷有新的EVs提取和純化技術被開發(fā)和改進，如抗體親和法、電泳法等，這些技術將進一步擴展EVs的應用范圍和研究內(nèi)容。