抗體定制的核心流程通常包含哪些關鍵步驟？
日期：2025-10-22 13:55:02
抗體定制的核心流程主要包含抗原制備、免疫動物/細胞、抗體篩選、純化鑒定、規?；a五大關鍵步驟，整個流程需根據定制類型（多克隆/單克?。┖蛻脠鼍罢{整細節。
1、需求確認與方案設計：明確定制目標
這是流程的起點，直接決定后續所有步驟的方向。
明確核心需求：確定定制抗體的類型（多克隆抗體/單克隆抗體）、目標抗原（蛋白、多肽、小分子等）、應用場景（ELISA、WB、IHC等）及交付標準（效價、純度、產量）。
評估可行性：分析抗原的免疫原性，若抗原免疫原性弱（如小分子、短肽），需提前設計偶聯方案（如與BSA、KLH等載體蛋白偶聯）以增強免疫效果。
制定詳細方案：確定免疫動物種類（如兔、小鼠、山羊）、免疫周期、檢測方法及交付時間節點。
2、抗原制備：提供免疫基礎
高質量抗原是獲得高特異性、高效價抗體的前提。
抗原獲?。焊鶕枨筮x擇合適的制備方式，包括重組蛋白表達純化（如原核/真核表達系統）、天然蛋白提取、化學合成多肽等。
抗原純化與鑒定：通過層析（如Ni柱、GST柱）、電泳等方法純化抗原，使用SDS-PAGE、HPLC等檢測抗原純度（通常要求純度≥90%），確保無雜蛋白干擾免疫反應。
抗原處理（按需）：對小分子或短肽抗原進行載體偶聯，對易降解抗原添加保護劑，保證抗原在免疫過程中保持活性。
3、免疫與抗體生成：誘導機體產生目標抗體
通過多次免疫動物或培養免疫細胞，激發免疫系統產生針對目標抗原的特異性抗體。
（1）多克隆抗體制備路徑
動物免疫：按照預設方案，將抗原與佐劑（如弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑）混合后，通過皮下注射、腹腔注射等方式免疫動物。
加強免疫：首次免疫后，間隔2-4周進行2-3次加強免疫，逐步提高動物體內抗體效價。
血清收集：末次免疫后1-2周，通過心臟采血或耳緣靜脈采血獲取抗血清，離心分離血清備用。
（2）單克隆抗體制備路徑
動物免疫：流程與多克隆抗體類似，需確保免疫后小鼠脾臟中產生足量的特異性B淋巴細胞。
細胞融合：取免疫小鼠的脾臟細胞，與骨髓瘤細胞（如SP2/0細胞）在PEG（聚乙二醇）或電融合技術作用下融合，形成雜交瘤細胞。
雜交瘤篩選與克隆化：使用HAT培養基篩選出存活的雜交瘤細胞，通過有限稀釋法或單細胞克隆技術，篩選并克隆能分泌特異性抗體的雜交瘤細胞株。
4、抗體篩選與鑒定：確?？贵w質量
通過一系列檢測，篩選出符合需求的抗體，并驗證其關鍵性能指標。
效價檢測：采用ELISA法檢測抗血清或雜交瘤細胞上清液的抗體效價，確保抗體濃度達到預設標準（如多克隆抗體效價≥1:10000）。
特異性鑒定：使用WB（蛋白免疫印跡）、IHC（免疫組化）、FlowCytometry（流式細胞術）等方法，驗證抗體是否能特異性結合目標抗原，排除交叉反應。
親和力檢測：通過SPR（表面等離子體共振）或ELISA競爭法，測定抗體與抗原的親和力，確保滿足后續應用對親和力的要求。
5、抗體純化與規?；a：獲取最終產品
對篩選合格的抗體進行純化，并根據需求擴大生產規模。
抗體純化：根據抗體類型選擇合適的純化方法，多克隆抗體常用ProteinA/G層析、抗原親和層析；單克隆抗體可通過雜交瘤細胞培養（腹水培養或無血清懸浮培養）后，再進行層析純化，最終獲得高純度抗體（通常純度≥95%）。
規?；a：若需大量抗體，多克隆抗體可通過加大免疫動物數量、多次采血實現；單克隆抗體可通過生物反應器擴大雜交瘤細胞培養規模，或采用CHO細胞表達系統進行重組抗體生產。
質量質控與分裝：對純化后的抗體進行純度、內毒素、穩定性檢測，合格后分裝成不同規格（如100μL、1mL），并根據儲存要求（如-20℃、4℃）添加保護劑，完成最終交付。
