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mif免疫小鼠制備抗體的步驟

日期:2023-07-28 13:38:56

    MIF(Macrophage Migration Inhibitory Factor)是一種重要的細胞因子,在炎癥、免疫和腫瘤等生理與病理過程中起著重要作用。如果您想制備抗MIF的小鼠單克隆抗體,下面是一般的制備步驟:
 
    選擇合適的免疫原:根據您的需要和實驗目的,選擇合適的MIF蛋白或多肽作為免疫原。可以通過購買純化的重組MIF蛋白或自行表達和純化目標蛋白。
 
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免疫程序
 
    將MIF免疫原與適量的佐劑(如完全佐劑或氫氧化鋁佐劑)混合,制備成免疫液。
    根據小鼠的年齡和性別,注射免疫液到小鼠體內進行初次免疫。通常,免疫液會注入小鼠的腹腔或足墊。
    在免疫后的2-3周內,再次注射相同的免疫液進行增強免疫。
    進行額外的免疫增強,以提高產生抗體的效果。

獲得免疫小鼠血清
 
    在最后一次免疫后,等待一段時間,使小鼠產生足夠數量的抗體。
    從小鼠尾靜脈或其他合適的位置采集血液樣品。
    將血液樣品放置在4°C冷藏,經離心分離血清。

混合細胞技術
 
    通過混合細胞技術,將小鼠的脾細胞與遺傳背景相同的骨髓瘤細胞(如SP2/0或NS0)進行融合,以產生雜交瘤細胞。
    混合細胞可使用聚乙二醇(PEG)或電擊融合方法進行融合。融合后的細胞會形成雜交瘤。
    雜交瘤細胞在選擇培養基中存活,非雜交瘤細胞會逐漸死亡。

篩選和克隆
 
    將雜交瘤細胞均勻分布到96孔微孔板(或其他適宜的培養器皿)中。
    使用ELISA或其他合適的方法,對細胞上清液進行篩選,檢測抗體水平。
    選擇最高抗體滴度的細胞,進行單克隆細胞的限稀養培養,最終得到穩定的單克隆細胞株。
 
擴大培養和抗體純化
 
    將單克隆細胞株進行擴大培養,以獲得足夠量的抗體。
    使用合適的方法(如蛋白A/G親和層析、蛋白L層析等)對培養上清中的抗體進行純化和富集。
 
    小鼠制備抗體的過程可能需要幾個月的時間,并且需要符合動物實驗倫理和法規的要求。在實施之前,請確保獲得相關的倫理許可和實驗操作的指導。